Xác định hàm lượng caffeine trong đồ uống bằng vi sắc tố lỏng

Chi tiết vụ án

Caffeine là một chất alkaloid methylxanthine tự nhiên có mặt rộng rãi trong nguyên liệu thô như hạt cà phê, lá trà và hạt ca cao.Nó phục vụ như một chất phụ gia chức năng cốt lõi và hợp chất hương vị đặc trưng trong đồ uống có sẵn trên thị trường, bao gồm đồ uống có ga, đồ uống năng lượng, đồ uống dựa trên trà và đồ uống cà phê.Tuy nhiên, tiêu thụ quá mức và lâu dài có thể dễ dàng gây ra các phản ứng bất lợi, bao gồm nhịp tim, mất ngủ và quá kích thích thần kinh.trẻ em, và những người mắc bệnh tim mạch có ngưỡng dung nạp thậm chí thấp hơn.Các tiêu chuẩn an toàn thực phẩm ở nhiều quốc gia đã thiết lập các giới hạn quy định rõ ràng về hàm lượng caffeine trong đồ uống.

Ở Trung Quốc, tiêu chuẩn an toàn thực phẩm quốc gia có tựa đề "Quyết định caffeine trong đồ uống" (GB 5009.139-2014) là cơ sở pháp lý để xác định định lượng caffeine trong ma trận đồ uốngChromatography chất lỏng hiệu suất cao (HPLC), do độ phân giải tuyệt vời, khả năng chống nhiễu ma trận mạnh mẽ và độ chính xác định lượng cao,đã trở thành phương pháp được lựa chọn để phân tích các mẫu ma trận phức tạp, bao gồm các loại đồ uống hỗn hợp khác nhau, đồ uống có chứa sữa và đồ uống chức năng thảo dược.Thí nghiệm này được thực hiện theo phương pháp sắc tố lỏng hiệu suất cao được chỉ định trong tiêu chuẩn quốc gia GB 5009.139-2014, thiết lập giao thức xử lý trước mẫu và phân tách/xác định nhiễm sắc thể lỏng cho các mẫu đồ uống,và hoàn thành việc xác định chất lượng và phân tích định lượng caffeine trong các loại đồ uống khác nhau.

Từ khóa: Chromatography chất lỏng hiệu suất cao; caffeine; đồ uống; xác định hàm lượng.

1. Công cụ và chất phản ứng

1.1 Danh sách cấu hình hệ thống nhiễm sắc thể lỏng

Bảng 1. Danh sách cấu hình thiết bị

Không, không.	Tên	Qty
1	Hệ thống Chromatography LC3500	1
2	P3500B Máy bơm gradient áp suất cao kép	1
3	CT3500 Cửa lò cột	1
4	AS3500 Máy lấy mẫu tự động hiệu suất cực cao	1
5	SmartLab CDS 2.0 Chromatography Data Station	1
6	C18 Cột, 5μm, 4,6 × 250 mm	1

1.2 Danh sách các chất phản ứng và tiêu chuẩn

Bảng 2. Danh sách các chất phản ứng và tiêu chuẩn

Không, không.	Chất phản ứng hoặc tiêu chuẩn tham chiếu	Độ tinh khiết
1	Methanol	LC lớp
2	Nước siêu tinh khiết	️
3	Magnesium oxit	Mức độ AR
4	axit trichloroacetic	Mức độ AR

1.3 Vật liệu thí nghiệm và thiết bị phụ trợ

Máy làm sạch siêu âm;

Máy trộn xoáy;

0.45μm màng lọc pha nước microporous

2Phương pháp thí nghiệm

2.1 Chuẩn bị các giải pháp tiêu chuẩn

2.1.1 Giải pháp dự trữ tiêu chuẩn caffeine (2,0 mg/mL): Đánh nặng chính xác 20 mg tiêu chuẩn tham khảo caffeine (đến 0,1 mg gần nhất) vào một bình 10mL, hòa tan và làm đầy theo thể tích với methanol.Lưu trữ trong tủ lạnh ở 4°C. Thời hạn sử dụng là 6 tháng.

2.1.2 Caffeine Standard Intermediate Solution (200μg/mL): Chuyển chính xác 5,0mL dung dịch gốc tiêu chuẩn caffeine (2.1.1) vào một bình 50 ml và làm đầy với nước.°C. Thời hạn sử dụng là 1 tháng.

2.1.3 Các dung dịch làm việc tiêu chuẩn caffeine cho đường cong hiệu chuẩn: Chuyển 0,5 mL, 1,0 mL, 2,0 mL, 5,0 mL và 10,0 mL dung dịch trung gian tiêu chuẩn caffeine (2.1.2) vào các bình 10 ml riêng biệt, và làm đầy với nước.0μg/mL, 20.0μg/mL, 40.0μg/mL, 100μg/mL, và 200μChuẩn bị ngay trước khi sử dụng.

2.2 Xử lý trước mẫu

2.2.1 Đồ uống giống cola

(a) Khử khí: Sonicate mẫu bằng cách sử dụng một chất tẩy rửa siêu âm ở 40 °C°C trong 5 phút.

b) Làm sạch: Đánh nặng 5g mẫu (chính xác đến 0,001g), chuyển vào một bình 5ml,và bổ sung đến khối lượng bằng nước (đảm bảo rằng hàm lượng caffeine trong dung dịch mẫu nằm trong phạm vi đường cong hiệu chuẩn). Trộn kỹ. Thêm 0,5g magie oxit, lắc tốt, và để đứng. Lấy supernatant và lọc nó qua màng vi lỗ cho phân tích tiếp theo.

2.2.2 Các sản phẩm cà phê và trà lỏng có chứa sữa

Đánh nặng 1g mẫu (chính xác đến 0,001g), chuyển vào một bình 10mL,và bổ sung đến khối lượng bằng dung dịch axit trichloroacetic (đảm bảo rằng hàm lượng caffeine trong dung dịch mẫu nằm trong phạm vi đường cong hiệu chuẩn). trộn kỹ và để đứng cho sự kết tủa protein. lấy chất siêu và lọc nó qua màng vi phân để phân tích sau đó.

2.3 Điều kiện thử nghiệm

2.3.1 Điều kiện nhiễm sắc thể

Cột: C18, 4.6×250mm, 5μm

Giai đoạn di động: Methanol/nước = 24/76 (v/v)

Tốc độ lưu lượng: 1,0 mL/min

Nhiệt độ cột: 25°C

Độ dài sóng phát hiện: 272nm

Khối lượng tiêm: 10μL

3Kết quả thí nghiệm.

3.1 Không chứa