Dư lượng Nitroimidazole trong thịt lợn: Phương pháp LCMS-TQ9200 LC-MS/MS của Wanyi được thẩm định theo GB 31658.23-2022

Nitroimidazole là các loại thuốc kháng khuẩn và kháng protozoa tổng hợp, có hiệu quả trong việc ức chế vi khuẩn kỵ khí và trùng roi. Chúng từng được sử dụng rộng rãi trong chăn nuôi và nuôi trồng thủy sản để kiểm soát nhiễm trùng đường tiêu hóa và bệnh do động vật nguyên sinh, giúp tăng tỷ lệ sống. Tuy nhiên, các loại thuốc gốc và các chất chuyển hóa của chúng có độc tính rõ ràng: chúng được chuyển hóa nhanh chóng trong động vật thành nhiều chất chuyển hóa hoạt động, một số trong đó tồn tại trong mô lâu hơn nhiều so với hợp chất gốc.

Các nghiên cứu độc chất học cho thấy các thuốc nitroimidazole gốc và các chất chuyển hóa chính của chúng có khả năng gây ung thư, gây đột biến gen và gây độc gen. Dư lượng trong thực phẩm có nguồn gốc động vật xâm nhập vào cơ thể con người thông qua chuỗi thức ăn, và việc tiêu thụ liều thấp trong thời gian dài có thể ảnh hưởng đến quá trình tạo máu, làm tổn thương nhiễm sắc thể và tăng nguy cơ đột biến gen. Do đó, Trung Quốc đã cấm sử dụng nitroimidazole trong động vật thực phẩm, và không cho phép có dư lượng trong thực phẩm có nguồn gốc động vật, làm cho việc kiểm tra dư lượng chính xác trở nên thiết yếu đối với an toàn thực phẩm.

GB 31658.23-2022, tiêu chuẩn an toàn thực phẩm quốc gia về dư lượng nitroimidazole trong thực phẩm có nguồn gốc động vật bằng phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phổ hai lần, là cơ sở pháp lý cho công việc này. Tiêu chuẩn này bao gồm các thuốc gốc và các chất chuyển hóa trong ma trận thịt bò, thịt cừu và các loại động vật khác. Một phòng thí nghiệm kiểm nghiệm cần một quy trình làm việc đã được xác nhận cho thịt lợn bao gồm bốn hợp chất mục tiêu - metronidazole, hydroxymetronidazole, dimetridazole và hydroxydimetridazole - bao gồm cả các chất chuyển hóa hydroxy khó giữ và khó ion hóa hơn, ở mức dưới ppb, với sự chuyển giao thấp và độ chính xác ổn định trong các chuỗi tiêm dài.

Cân 2 g mẫu (chính xác đến 0.05 g) vào ống ly tâm 50 mL, thêm 10 uL dung dịch làm việc tiêu chuẩn nội chuẩn hỗn hợp 1 ug/mL, vortex trong 30 giây và để yên trong 10 phút. Thêm 15 mL ethyl acetate, vortex trong 2 phút và ly tâm ở 10.000 vòng/phút trong 5 phút. Chuyển phần dịch nổi và lặp lại quá trình chiết xuất một lần nữa với 15 mL ethyl acetate. Gộp cả hai dịch chiết và bay hơi đến khô dưới nitơ trong bể nước 25 độ C.

Hòa tan cặn trong 5 mL axit hydrochloric 0.1 mol/L, vortex trong 1 phút, thêm 5 mL n-hexane, lắc trong 1 phút và ly tâm ở 5.000 vòng/phút trong 5 phút. Loại bỏ lớp hexane và lặp lại bước loại bỏ chất béo một lần nữa với 5 mL hexane khác. Chuẩn bị cột chiết pha rắn với 3 mL axit hydrochloric 0.1 mol/L và 3 mL methanol, nạp lớp nước, rửa với 3 mL axit hydrochloric 0.1 mol/L và rửa giải với 4 mL methanol. Bay hơi dịch rửa giải đến khô ở 35 độ C dưới nitơ, hoàn nguyên trong 0.5 mL nước, vortex trong 1 phút và lọc trước khi tiêm.

Hiệu chuẩn khớp ma trận trong dịch chiết thịt lợn trắng bù trừ cho sự ức chế ion từ ma trận thịt và giữ cho định lượng đáng tin cậy ở mức vết. Hình dạng đỉnh tốt, không bị kéo đuôi, xác nhận rằng chiết xuất ethyl acetate, loại bỏ chất béo bằng hexane và làm sạch bằng SPE loại bỏ các nhiễu ở mức 1 ug/kg.

Hệ thống LC-MS/MS Wanyi LCMS-TQ9200 đã cung cấp một phương pháp đã được xác nhận cho bốn dư lượng nitroimidazole trong thịt lợn theo GB 31658.23-2022. Các đỉnh đối xứng, R2 trên 0.9995, độ chính xác trong vòng 10%, chuyển giao không đáng kể và hiệu suất phục hồi trong khoảng 60% đến 120% chứng minh rằng quy trình làm việc đáp ứng các yêu cầu định tính và định lượng thông thường cho việc sàng lọc và xác nhận thuốc thú y bị cấm, và cung cấp một cơ sở kỹ thuật đáng tin cậy cho việc giám sát rủi ro an toàn thực phẩm.

• Thu thập dữ liệu MRM ba tứ cực mang lại độ chọn lọc cần thiết để xác nhận dư lượng bị cấm ở mức 0.5 ug/kg trong ma trận thịt béo.
• Hóa học C18 dưới 2 um trên cột 2.1 mm ở tốc độ 0.3 mL/phút phân giải bốn chất phân tích trong vòng chưa đầy 8 phút, với mức tiêu thụ dung môi thấp.
• Các tiêu chuẩn nội chuẩn được đánh dấu đồng vị hiệu chỉnh cho sự mất mát phục hồi trong quá trình chiết xuất và SPE, ổn định kết quả giữa các lô.
• Loại bỏ chất béo bằng hexane trước khi thực hiện SPE bảo vệ cột và cột phân tích, kéo dài tuổi thọ trong các phòng thí nghiệm kiểm tra dư lượng có thông lượng cao.